問(wèn)題索引：

1.【問(wèn)題】PCR實(shí)驗(yàn)室的污染來(lái)源有哪些？

2.【問(wèn)題】豚鼠采血的方法有哪些？

3.【問(wèn)題】牛鮑計(jì)數(shù)板稀釋倍數(shù)怎樣計(jì)算？

具體解答：

1.【問(wèn)題】PCR實(shí)驗(yàn)室的污染來(lái)源有哪些？

【解答】①樣本間交叉污染：收集樣本的容器被污染或樣本密封不嚴(yán)外溢；不同樣本移液時(shí)忘記更換槍尖或未使用帶濾芯槍尖；移液器等實(shí)驗(yàn)器具及耗材未及時(shí)消毒滅菌；不同樣本同時(shí)開(kāi)蓋或樣本劇烈震蕩、反復(fù)吹吸導(dǎo)致氣溶膠形成擴(kuò)散，相互交叉污染。

②實(shí)驗(yàn)試劑污染：主要是在PCR組分試劑加[醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)原創(chuàng)]樣過(guò)程中，由于移液器、容器、陰性對(duì)照及其它試劑被核酸模板或陽(yáng)性對(duì)照污染。加樣過(guò)程中，因?yàn)镻CR試劑對(duì)溫度十分敏感，需要通過(guò)冰浴使得PCR試劑和PCR板/管處于OC，但這個(gè)過(guò)程也是充滿(mǎn)了污染的風(fēng)險(xiǎn)的。

③擴(kuò)增產(chǎn)物污染：大量拷貝的產(chǎn)物泄[醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)原創(chuàng)]漏或擴(kuò)增后的PCR反應(yīng)管意外開(kāi)蓋，這是PCR反應(yīng)中最主要最常見(jiàn)的污染問(wèn)題。因?yàn)镻CR產(chǎn)物拷貝量大，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于PCR檢測(cè)數(shù)個(gè)拷貝的極限，所以極微量的PCR產(chǎn)物污染，就可形成假陽(yáng)性。

④克隆質(zhì)粒污染：作為陽(yáng)性質(zhì)控品的克隆質(zhì)粒外溢。

2.【問(wèn)題】豚鼠采血的方法有哪些？

【解答】豚鼠采血方法如下：

①耳緣切口采血：先將豚鼠耳消毒，用刀片[醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)原創(chuàng)]沿血管方向割破耳緣，切口約長(zhǎng)0.5cm，在切口邊緣涂上20%的檸檬酸鈉溶液，防止血凝，則血可自切口處流出。此法采血每次可采0.5ml。

②背中足靜脈采血：固定豚鼠，將其右或左后[醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)原創(chuàng)]肢膝關(guān)節(jié)伸直，腳背消毒，找出足靜脈，左手拇指和食指拉住豚鼠的趾端，右手將注射針刺入靜脈，拔針后立即出血。

③心臟采血：用手指觸摸，選擇心跳最明顯的部位，把注射針刺入心臟，血液即流入針管。心臟采血時(shí)所用的針頭應(yīng)細(xì)長(zhǎng)些，以免發(fā)生采血后穿刺孔出血。

3.【問(wèn)題】牛鮑計(jì)數(shù)板稀釋倍數(shù)怎樣計(jì)算？

【解答】例如：因?yàn)橐♂屟?，?ml的稀釋[醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)原創(chuàng)]液稀釋10μl的血液，即加入稀釋液和血液后總的量變成2010μl。所以要用總量除以稀釋前的血液量即為稀釋倍數(shù)。

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