熒光抗體的鑒定有哪些?
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1.熒光素與蛋白質(zhì)的結(jié)合比率 熒光素與蛋白的過量結(jié)合是非特異熒光著色的來源之一,而未結(jié)合者有抑制特異性熒光抗體反應(yīng)的作用。
熒光素結(jié)合到蛋白上的量的重要指標(biāo)是熒光素與蛋白質(zhì)的結(jié)合比率(F/P)。比值越大,則抗體結(jié)合的熒光素越多,反之則結(jié)合越少。一般用于組織切片的熒光抗體,其F/P=1.5為宜,用于活細(xì)胞染色F/P=2.4為宜。
2.抗體效價 可以采用雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)測定,抗原含量為1g/L時,抗體效價>1:16者較為理想。
3.抗體特異性 ①吸收試驗(yàn):向熒光抗體中加入過量相應(yīng)抗原反應(yīng)后,再用于陽性標(biāo)本染色,應(yīng)不出現(xiàn)明顯熒光;②抑制試驗(yàn):陽性標(biāo)本先與相應(yīng)未標(biāo)記抗體反應(yīng),洗滌后,再加熒光抗體染色,熒光強(qiáng)度應(yīng)受到明顯抑制。
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