酶促反應(yīng)中的常用的底物是什么呢?
酶促反應(yīng)中的常用的底物是什么呢?跟著小編來(lái)學(xué)習(xí)一下吧!
1.HRP的底物
(1)鄰苯二胺(OPD):是HRP最為敏感的色原底物之一。OPD在HRP的作用下顯橙黃色,加強(qiáng)酸如硫酸或鹽酸終止反應(yīng)后呈棕黃色,最大吸收峰在492nm波長(zhǎng)。OPD應(yīng)用液穩(wěn)定性差,易變色,需新配制后在1小時(shí)內(nèi)使用,顯色反應(yīng)過(guò)程需避光,而且具有致癌性。
(2)四甲基聯(lián)苯胺(TMB):TMB經(jīng)HRP作用后變?yōu)樗{(lán)色,加入硫酸終止反應(yīng)后變?yōu)?/span>黃色,最大吸收峰波長(zhǎng)450nm。TMB穩(wěn)定性好,成色無(wú)需避光,無(wú)致突變作用,是目前ELISA中應(yīng)用最廣泛的底物。缺點(diǎn)是水溶性差。
(3)其他:5-氨基水楊酸(5-ASA)和2,2-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽(ABTS)。
2.AP的底物
常用對(duì)-硝基苯磷酸酯(p-NPP),p-NPP經(jīng)AP作用后的產(chǎn)物為黃色對(duì)硝基酚,最大吸收峰波長(zhǎng)為405nm。
3.β-半乳糖苷酶(β-Gal)的底物
常用4-甲基傘酮基-R-D半乳糖苷(4-MUU),酶作用后,生成高強(qiáng)度熒光物4-甲基傘形酮(4-MU),其敏度性較HRP高30~50倍,但測(cè)量時(shí)需用熒光計(jì)。
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