均相酶免疫測定如何進行的?
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利用酶標志物與相應(yīng)的抗原或抗體結(jié)合后,標記酶的活性會發(fā)生改變的原理,可以在不將結(jié)合和游離酶標志物分離的情況下,通過測定標記酶的活性的改變,而確定抗原或抗體的含量。該法主要用于小分子激素和半抗原(如藥物)的測定,均相法的優(yōu)點是適合于自動化測定,但反應(yīng)中被抑制的酶活力較小,需用靈敏的光度計測定,反應(yīng)的溫度也需嚴格控制。
(一)酶放大免疫測定技術(shù)(EMIT) EMIT的基本原理是半抗原與酶結(jié)合成酶標半抗原。當與抗體結(jié)合后,所標的酶與抗體密切接觸,使酶的活性中心受到影響而活性被抑制。反應(yīng)后酶活力大小與標本中的半抗原量呈一定的比例,從酶活力的測定結(jié)果就可推算出標本中半抗原的量。
(二)克隆酶供體免疫分析(CDEIA) DNA重組技術(shù)可分別合成某種功能酶(如β-D半乳糖苷酶)分子的兩個片段,大片段稱為酶受體(EA),小分子稱作酶供體(ED),兩者單獨均無酶活性,一定條件下結(jié)合形成四聚體方具酶活性??寺∶腹w免疫測定(CDEIA)的反應(yīng)模式為競爭法。
標本中的抗原和酶供體(ED)標記的抗原與特異性抗體競爭結(jié)合,形成兩種抗原抗體復(fù)合物。ED標記的抗原與抗體結(jié)合后由于空間位阻,不再能與酶受體(EA)結(jié)合,而游離的ED標記的抗原上的ED可和EA結(jié)合,形成具有活性的酶,加入底物測定酶活性,酶活力的大小與標本中抗原含量成正比。
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