B細胞功能檢測都有哪些方法呢
B細胞功能檢測都有哪些方法呢?為了幫助更多考生了解,醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)為大家搜集整理如下:
B細胞主要產(chǎn)生Ig參與機體體液免疫應(yīng)答,B細胞功能低下或缺乏者對外源性抗原刺激的應(yīng)答能力減弱或缺陷,特異性抗體產(chǎn)生減少或缺如。
(一)B細胞增殖試驗:小鼠B細胞可用細菌脂多糖(LPS)作為刺激物,人則用含SPA的金黃色葡萄球菌菌體及抗IgM抗體等刺激。
(二)溶血空斑試驗
1.原理:將SRBC免疫的小鼠脾臟(或家兔淋巴結(jié))制成單個細胞懸液,與SRBC在瓊脂糖凝膠內(nèi)混合后傾注于小平皿或玻片上。脾細胞中的抗體生成細胞釋放抗SRBC抗體,使其周圍的SRBC致敏,在補體參與下可將SRBC溶解,形成肉眼可見的溶血空斑。每一個空斑中央含一個抗體形成細胞,空斑數(shù)目即為抗體形成細胞數(shù)。空斑大小表示抗體形成細胞產(chǎn)生抗體的多少。
2.方法學(xué)
(1)經(jīng)典溶血空斑形成試驗:用于檢測實驗動物抗體形成細胞的功能。直接法測到的細胞為IgM類抗體形成細胞;間接法在小鼠脾細胞和SRBC混合時,再加抗鼠Ig抗體,使抗體產(chǎn)生細胞所產(chǎn)生的IgG或IgA與抗Ig抗體結(jié)合成復(fù)合物,此時能活化補體導(dǎo)致溶血。只能檢測抗RBC抗體的產(chǎn)生細胞,難以檢測人類的抗體產(chǎn)生情況。
(2)被動溶血空斑試驗:是指抗體形成細胞產(chǎn)生的Ig與SRBC上的抗原結(jié)合,在補體參與下出現(xiàn)溶血反應(yīng)。將吸附有已知抗原的SRBC、待檢B細胞、補體及適量瓊脂糖液混合,傾注平皿,溫育1~3小時后,形成肉眼可見的溶血空斑。該試驗可檢測SRBC上抗原相應(yīng)的抗體形成細胞,因此應(yīng)用范圍較廣。
3.臨床應(yīng)用與評價:溶血空斑試驗主要用于測定藥物和手術(shù)等因素對體液免疫功能的影響,評價免疫治療或免疫重建后機體產(chǎn)生抗體的能力。
(三)酶聯(lián)免疫斑點試驗(ELISPOT)
1.原理:用抗原包被固相載體,加入待檢的抗體產(chǎn)生細胞,即可誘導(dǎo)抗體的分泌。分泌的抗體與包被抗原結(jié)合,在抗體分泌細胞周圍形成抗原抗體復(fù)合物,使細胞吸附于載體上,加入酶標(biāo)記的第二抗體與細胞上的抗體結(jié)合,通過底物顯色反應(yīng)的深淺,可測定出生成的抗體量,并可在鏡下計數(shù)著色的斑點形成細胞。
2.應(yīng)用與方法學(xué)評價
該方法既可檢測抗體分泌細胞,又可檢測抗體分泌量。其優(yōu)點是穩(wěn)定、特異、抗原用量少;可同時檢測不同抗原誘導(dǎo)的不同抗體分泌,并可定量;可檢測組織切片中分泌抗體的單個細胞。
(四)體內(nèi)實驗
B細胞功能減低或缺陷,可表現(xiàn)為體內(nèi)Ig和血型抗體量下降或缺如。常用于體內(nèi)抗體產(chǎn)生的特異性抗原有白喉類毒素、破傷風(fēng)類毒素、多價肺炎鏈球菌菌苗等。將適量抗原皮下或肌內(nèi)注射免疫,并于免疫前及免疫后1、2、3周分別采血,分離血清,測定受檢者免疫前后相應(yīng)抗體的效價,判斷受檢者體內(nèi)B細胞的功能。
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