動(dòng)力學(xué)法測(cè)定酶的活性濃度
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總單位時(shí)間內(nèi)底物減少或產(chǎn)物增加的量。
在t2-t1時(shí)間內(nèi)吸光度的變化與所測(cè)物質(zhì)濃度成正比。
實(shí)際操作中,測(cè)定兩個(gè)固定時(shí)間的吸光度差值,只要此期間待測(cè)物消耗<5%,就可以采用標(biāo)準(zhǔn)濃度對(duì)照法計(jì)算樣本濃度,所以動(dòng)力學(xué)法有時(shí)又稱為固定時(shí)間法。
與終點(diǎn)法相比,動(dòng)態(tài)法測(cè)定中待測(cè)物無(wú)須完全轉(zhuǎn)化,故工具酶的用量較少,為了保證有足夠的測(cè)定線性,所用酶的Km應(yīng)足夠大。如所用工具酶Km太小,可在反應(yīng)體系中加入競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑,以加大Km。
動(dòng)力學(xué)法對(duì)于測(cè)定儀器的要求更嚴(yán)格,動(dòng)態(tài)法由于測(cè)定反應(yīng)動(dòng)態(tài)過(guò)程中的吸光度,檢測(cè)的信號(hào)小,溫度對(duì)測(cè)定的影響很大,這要求儀器的電噪聲小,吸光度應(yīng)讀準(zhǔn)到0.0001,溫度變化<0.1%。
終點(diǎn)法可受到乳糜、黃疸和溶血的影響,測(cè)定時(shí)需設(shè)定樣品空白。
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