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（1）外周血單個核細胞的分離

外周血中單個核細胞（淋巴細胞和單核細胞）的比重與紅細胞、多核白細胞及血小板不同，介于1.075～1.090之間，因而可利用一種比重介于1.075～1.092之間而近于等滲的溶液作密度梯度離心，使一定比重的細胞按相應密度梯度分布而加以分離。常用的分層液有Ficoll與Percoll兩種。

（2）淋巴細胞的分離

1）純淋巴細胞群的采集：利用單核細胞在37℃和Ca2+存在時，能主動粘附在玻璃、塑料、尼龍毛、棉花纖維或葡聚糖凝膠的特性，從單個核細胞懸液中除去單核細胞，從而獲得純淋巴細胞群。主要的方法有：①粘附貼壁法；②吸附柱過濾法；③磁鐵吸引法。

2）淋巴細胞亞群的分離原則：選擇純化所需細胞的方法是陽性選擇法，而選擇性去除不要的細胞，僅留下所需的細胞為陰性選擇法。常用的方法包括：①E花環(huán)沉降法；②尼龍毛柱分離法；③親和板結合分離法；④磁性微球分離法及熒光激活細胞分離儀分離法。

（3）淋巴細胞的保存與活力測定

①短期保存技術：短期保存可置于4℃保存。

②長期保存技術：液氮深低溫（-196℃）環(huán)境保存細胞，加入二甲亞砜作為保護劑。

③活力測定：最簡便常用的為臺盼藍染色法，呈藍色。