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引起蛋白質沉淀的方法:公衛(wèi)助理醫(yī)師備考

2012-08-03 16:53 醫(yī)學教育網
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2012年公衛(wèi)助理醫(yī)師考試即將在9月份開考,醫(yī)學教育網收集整理了公衛(wèi)執(zhí)業(yè)助理醫(yī)師考試基礎綜合的?贾R點,供各位考生參閱。

(一)鹽析(Salting Out)

在蛋白質溶液中加入大量的中性鹽以破壞蛋白質的膠體穩(wěn)定性而使其析出,這種方法稱為鹽析。常用的中性鹽有硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈉等。各種蛋白質鹽析時所需的鹽濃度及pH不同,故可用于對混和蛋白質組分的分離。例如用半飽和的硫酸銨來沉淀出血清中的球蛋白,飽和硫酸銨可以使血清中的白蛋白、球蛋白都沉淀出來,鹽析沉淀的蛋白質,經透析除鹽,仍保證蛋白質的活性。調節(jié)蛋白質溶液的pH至等電點后,再用鹽析法則蛋白質沉淀的效果更好。

(二)重金屬鹽沉淀蛋白質

蛋白質可以與重金屬離子如汞、鉛、銅、銀等結合成鹽沉淀,沉淀的條件以pH稍大于等電點為宜。因為此時蛋白質分子有較多的負離子易與重金屬離子結合成鹽。重金屬沉淀的蛋白質常是變性的,但若在低溫條件下,并控制重金屬離子濃度,也可用于分離制備不變性的蛋白質。

臨床上利用蛋白質能與重金屬鹽結合的這種性質,搶救誤服重金屬鹽中毒的病人,給病人口服大量蛋白質,然后用催吐劑將結合的重金屬鹽嘔吐出來解毒。

(三)生物堿試劑以及某些酸類沉淀蛋白質

蛋白質又可與生物堿試劑(如苦味酸、鎢酸、鞣酸)以及某些酸(如三氯醋酸、過氯酸、硝酸)結合成不溶性的鹽沉淀,沉淀的條件應當是pH小于等電點,這樣蛋白質帶正電荷易于與酸根負離子結合成鹽。

臨床血液化學分析時常利用此原理除去血液中的蛋白質,此類沉淀反應也可用于檢驗尿中蛋白質。

(四)有機溶劑沉淀蛋白質

可與水混合的有機溶劑,如酒精、甲醇、丙酮等,對水的親和力很大,能破壞蛋白質顆粒的水化膜,在等電點時使蛋白質沉淀。在常溫下,有機溶劑沉淀蛋白質往往引起變性。例如酒精消毒滅菌就是如此,但若在低溫條件下,則變性進行較緩慢,可用于分離制備各種血漿蛋白質。

(五)加熱凝固

將接近于等電點附近的蛋白質溶液加熱,可使蛋白質發(fā)生凝固(coagulation)而沉淀。加熱首先是加熱使蛋白質變性,有規(guī)則的肽鏈結構被打開呈松散狀不規(guī)則的結構,分子的不對稱性增加,疏水基團暴露,進而凝聚成凝膠狀的蛋白塊。如煮熟的雞蛋,蛋黃和蛋清都凝固。

蛋白質的變性、沉淀,凝固相互之間有很密切的關系。但蛋白質變性后并不一定沉淀,變性蛋白質只在等電點附近才沉淀,沉淀的變性蛋白質也不一定凝固。例如,蛋白質被強酸、強堿變性后由于蛋白質顆粒帶著大量電荷,故仍溶于強酸或強減之中。但若將強堿和強酸溶液的pH調節(jié)到等電點,則變性蛋白質凝集成絮狀沉淀物,若將此絮狀物加熱,則分子間相互盤纏而變成較為堅固的凝塊。

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