近十幾年，國內外報道了免疫分析中的假陽性、假陰性或其他的特異性干擾，尤其對雙抗體夾心法測定干擾明顯。干擾物有：血漿、血清蛋白（類風濕性因子、結合蛋白）、嗜異性抗體（Id）、人抗動物抗體（HAAA）和藥物及其導致的代謝物等，尤其是后兩種抗體干擾最多。

隨著鼠源性單克隆抗體（鼠McAb）應用于免疫顯像及免疫治療，使患者產生人抗鼠抗體（HAMA）。而人在與寵物的接觸中也易產生HAAA.注射疫苗及患腹腔疾病時，食物抗原也會產生HAAA.HAAA和HAMA的存在使免疫分析容易產生假陰陽性。一旦假陽性或假陰性的結果沒有被發(fā)現，患者將要承受不必要的治療及身體和精神上的痛苦。因而，鑒定和排除這些干擾物成為當務之急。

1、嗜異性抗體的干擾

嗜異性抗體（Id）是由低純度抗原引起的，又稱之為對非特異性抗原產生的抗體應答。1980年發(fā)現了Id對AFP的干擾。它是一類結合力弱的抗體，分為天然抗體和自身免疫抗體。前者又分為天然多特異性抗體、獨特型抗體和類風濕性因子（RF）。天然Id是干擾物的主要來源。

天然抗體結合力弱，具有多特異性，普遍存在于人體中，多為IgG.它識別多種化學結構和自身抗原。推測它是由體細胞突變導致抗體高變區(qū)的多樣化而產生的。一旦抗原侵入免疫系統(tǒng)，則誘導體細胞突變，產生各種非特異性的抗體。隨著抗原促進細胞分化，體細胞突變以高頻率進行，產生高特異性的抗體。像RF一類的抗體比天然抗體更多的體細胞突變。天然抗體中的獨特型抗體能和抗原結合又能和抗體結合的高變區(qū)，因此，它能和一些多特異抗體結合。當血清含有它們時，其結合大大增加，并出現Fab-Fab二聚體狀態(tài)。醫(yī)學教育網|搜索整理

2、人抗動物抗體的干擾

HAAA有IgG、IgA、IgM和IgE屬，可分為抗獨特型和抗同種型，有多種動物IgO抗兔、抗山羊抗體作為免疫分析的第二抗體。由于不同動物Ig分子間蛋白質序列有大量同源性，因此多種動物Ig之間會發(fā)生交叉反應。

HAAA可由醫(yī)源性和非醫(yī)源性因素引起。前者是人體免疫系統(tǒng)對藥用性蛋白的正常應答。動物身上可得到的藥劑非常多，如：鼠McAb的靶向性藥物或成像劑、馬抗毒素和抗胸腺細胞Ig、羊抗地高辛Fab、嵌合抗體和胰島素等。另外還有輸血和接種疫苗等途徑。它們的存在會對體外的免疫分析產生干擾，也會使治療抗體失活和干擾小鼠McAb治療和成像。

3、嗜異性抗體與HAAA的干擾

Prince等提出雙位點免疫分析的干擾機制，更多的干擾現象被揭示，干擾機制也有了很多的假設。首先Id的干擾具有廣泛性，HAAA的干擾呈現出上升趨勢；其次與多克隆抗體（PcAb）一樣，McAb的分析中也存在著干擾；許多干擾因素對一種分析方法有影響，而對另一種分析方法沒有影響。

在雙位點免疫分析中，血清中的HAMA能夠非特異性橋聯捕捉抗體和示蹤抗體而導致假陽性，而假陰性是由于HAAA與捕捉抗體、示蹤抗體其中之一結合，使它們不能與分析物結合。Id的干擾機制和HAMA類似。形成Fab-Fab結構。另外分析用抗體Fc片段也會和干擾抗體結合形成干擾物。Id和HAAA的干擾，在競爭性結合分析中很少報道，可能是由于抗原和抗體間的高親和力，使得HAAA很難與抗原競爭，但當HAAA濃度很高時，也同樣造成了干擾。

4、干擾物的鑒定

鑒定干擾物的方法：采用另一種系列的分析方法重新測量樣品，如果干擾物是由獨特型抗體間的互補反應所引起的，那么不同的雙位點分析方法得出的結果是大相徑庭的。此外，阻斷劑也可用于鑒定干擾物，通過添加陰斷劑導致值的改變是“干擾物存在”的一個假設性證據。采用一系列濃度梯度的阻斷劑，可以防止具有高濃度的Id或HAAA的患者超過試劑的阻斷能力。臨床實驗室鑒定干擾物也可采用高濃度的動物混合血清做稀釋試驗，當稀釋樣品后，測出的值不成比例說明存在干擾物。

此外，HAMA試劑盒有：ImmuSTRIPHAMA、EFI-HAMA、HAMA-ELISAmedac、HAMARIA、IdealHAMAELISA及EnzygnostHAMA，它們不僅檢測是否存在干物，又能起監(jiān)測注射動物源性制劑引起的并發(fā)癥。

5、干擾物的排除

Id和HAAA的干擾機制相似，均為橋聯捕捉抗體和示蹤抗體，所以二者消除干擾的方法也類似。但HAAA能與特定的分析抗原競爭，且與分析用抗體的結合力稍強，因動物源性抗體使用越來越廣泛，因此它產生的干擾程度也較大，比Id的干擾更多特異性和弱結合力。影響因素包括性別、年齡、生活習慣（吸咽）和自身免疫性疾病等。

5.1預防在患者接受動物源泉性抗體治療前、中和后期，給予免疫抑制劑，如：環(huán)孢霉素、脫氧精胍菌素和環(huán)磷酰胺，即可大量阻止HAAA的產生，減輕動物源性抗體藥品產生的負反應。這些免疫抑制法適用HAAA引起的干擾，對Id效果甚微。

5.2抗體的處理去除抗體片段：由于HAAA能與分析用抗體中的Fc片段結合，Id能與分析用抗體的F（ab′）2與Fc結合，去除Fc可減少干擾物，降低動物源性Ig制劑的免疫原性。采用木瓜蛋白酶處理Ig去除Fc要比胃蛋白酶的效果更好。但是Id具有弱結合力，因此該方法對Id的干擾只能有限地減少。人源化抗體：用基因工程制備人源化嵌和抗體，通過將鼠Ig與人Ig的基因片段有序結合，得到低免疫原性的缺本，但要注意，它會誘導抗體產生人抗人抗體，而引起更多的麻煩。PEG的使用：即在大分子表面（如McAb）用水溶性PEG或mPEG包被，也能大大降低McAb的免疫原性。

5.3熱處理和其他目前不太主張用熱或酸處理來滅活血清中的干擾物，因為大多數的分析物都不穩(wěn)定，該方法曾用于CEA和CA72-4干擾物的處理。采用吸附在氟乙烯表面的鼠McAb、固相結合在瓊脂糖凝膠珠上的蛋白G、蛋白A、三氟乙酸沉淀法、巰基試劑法、陽離子交換劑和親和層析等方法，均對消除干擾物有一定效果。

5.4阻斷劑的使用阻斷劑包括非免疫Ig、PcAb、聯合IgG、非免疫鼠McAb.又可分為非特異性和特異性兩類。目前已經有商品化的阻斷劑如：IIR、NS-ABT、HBR、Heteroblock、MAB33及polyMAB33.將它們加入稀釋液或預處理的樣品中，通過非特異性和特異性阻斷劑與干擾物的結合達到減少干擾。消除干擾的效果由干擾物的濃度、類別或亞類，以及阻斷劑的類別和亞類決定。

5.4.1非特異性阻斷劑非特異性阻斷劑一般是制備分析用正常動物血清Ig，它是多種蛋白的混合物，盡可能多地吸收Id.如果分析用抗體是不同種屬，可用其中任何一種作為非Ig.若分析用抗體是同一種屬（鼠類），建議添加小牛Ig作為阻斷劑。非Ig的用量仍在討論中。有建議用1%正常動物的血清為宜，但也有報道說此濃度不足以排除干擾物。商品化試劑中MAK33、MAB33等屬于這類，MAK33必須熱處理（60℃，10min）并配以小牛血清才有明顯的效果。推測MAK33在高溫條件下聚集形成巨大復合體，結合位點的增多使得Id大量結合，減低干擾。

5.4.2特異性阻斷試劑特異性阻斷試劑是特異針對人Ig的。如IIR、HBR等。IIR是一種由Id和HAAA為免疫原產生的混合的鼠McAb，由于它與HAAA有較高親和力（109L/mol），所以作為阻斷HAMA的特異性試劑。HBR是鼠抗人IgM的McAb，在常規(guī)阻斷過程中，消除干擾的效果依賴于HAMA和它之間的結合常數（通常為106L/mol）。由于它倆的高度結合力，在一些分析中的阻斷能力強于非特異性阻斷劑。特異性阻斷劑與非特異性阻斷劑都不能完全排除干擾物，但前者能對IgM引起的干擾更有效些，而后者尤其小牛血清能夠阻斷特異性試劑所不能阻斷的干擾抗體。

5.5實驗方法的改進針對以上討論及自身體會，提出以下幾點改進意見：（1）分析用抗體采用不同種屬，如一株McAb、一株PcAb，使用與治療用抗體相同屬的抗體或使用PcAb作為阻斷劑。（2）在緩沖液中加入正常動物血清，它們能對Id有高親和力。（3）樣品中的干擾存在瞬時性，時有時無，注意避開其干擾峰值，建議采用重復測量。（4）雙位點檢測中推薦使用兩步法測量，且在第一次洗板后加入阻斷劑。（5）對干擾樣品作單獨處理，同時將干擾物測出。

Id與HAAA的干擾作用對免疫分析結果的準確性是一個很大的威脅，應該引起實驗人員及臨床醫(yī)生的高度關注及更多地了解患者的治療情況及生活習性，如是否有過動物源性制劑治療，是否飼養(yǎng)寵物等。實驗室應證實干擾物的存在范圍及程度，及時將信息反饋給臨床工作者，充分建立兩者的聯系和交流。廠商在研制試劑盒時，也應采用配套措施以減少干擾物，如提供阻斷試劑，在商品包裝中加注提示，存在干擾物及分析值僅供參考等字樣。（作者：黃飚，唐煒，金堅）