①紅細(xì)胞鹽水滲透脆性試驗(yàn)。原理:懸浮于等滲鹽水中的紅細(xì)胞形態(tài)不變,懸浮于低滲鹽水中的紅細(xì)胞則發(fā)生膨脹,直至破裂、溶血。用不同濃度的低滲鹽水來(lái)觀察紅細(xì)胞膜的最小抵抗力(開始溶血)和最大抵抗力(完全溶血)。抵抗力增強(qiáng)者稱脆性減低,反之,稱脆性增加。
正常值:開始溶血:0.42~0.46%氯化鈉溶液;完全溶血:0.32~0.34%氯化鈉溶液。
臨床意義:本試驗(yàn)用于測(cè)定紅細(xì)胞膜有無(wú)異常。滲透脆性增加見于遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥。
?、诩t細(xì)胞機(jī)械脆性試驗(yàn)。原理:紅細(xì)胞在體外由于機(jī)械性損傷可發(fā)生溶血。將抗凝血置震蕩器上按一定頻率和時(shí)間震動(dòng)后測(cè)紅細(xì)胞溶血的百分率。
正常值:7.5~23.9%。
臨床意義:遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥的病人,此試驗(yàn)的溶血百分率均可有不同程度的增高。尤其輕癥遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥的病人,此試驗(yàn)比紅細(xì)胞鹽水滲透脆性試驗(yàn)更敏感,有助于診斷。
?、鬯峄视腿芙庠囼?yàn)(AGLT)。原理:在20~28℃時(shí),正常紅細(xì)胞加入酸化甘油后會(huì)緩慢溶血而出現(xiàn)光密度下降。當(dāng)光密度下降為起始光密度一半時(shí)所需時(shí)間,稱AGLT50。遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥病人紅細(xì)胞的AGLT50較正常縮短。
正常值:AGLT50>30分鐘。
臨床意義:此試驗(yàn)對(duì)遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥的診斷敏感性極高。而其他溶血性疾病無(wú)假陽(yáng)性結(jié)果,利于鑒別診斷。
④自身溶血試驗(yàn)與糾正試驗(yàn)。原理:以無(wú)菌的脫纖維血液,于37℃溫育24~48小時(shí),觀察其自然溶血程度(百分率),并加入葡萄糖及ATP后觀察其溶血程度有無(wú)減輕稱為糾正試驗(yàn)。
正常值:
0.9%氯化鈉10%葡萄糖
24小時(shí)<0.5%<0.4%
48小時(shí)<3.5%<0.6%
臨床意義:正常人紅細(xì)胞經(jīng)溫育24小時(shí)后,不溶血或極輕微溶血。48小時(shí)后僅小量溶血。加入葡萄糖后溫育,溶血明顯減慢。由于細(xì)胞膜的缺陷所致遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥病人,自身溶血發(fā)生快且明顯。因酶的缺陷所致的先天性非球形紅細(xì)胞溶血性貧血病人,自身溶血也常增強(qiáng),而其中Ⅰ型病人,若在實(shí)驗(yàn)中加入葡萄糖或ATP,則溶血明顯減輕,見于葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G-6-PD)缺乏;其Ⅱ型病人,在試驗(yàn)中加入ATP可使溶血明顯減輕,若加葡萄糖則無(wú)效,見于丙酮酸激酶缺乏??梢澡b別不同病因所致的先天性非球形紅細(xì)胞溶血性貧血。
⑤酸溶血試驗(yàn)。原理:正常人紅細(xì)胞在自身新鮮血中、弱酸(pH6.6~6.8)條件下,孵育1小時(shí),不發(fā)生溶血。而陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿的病人,因紅細(xì)胞本身結(jié)構(gòu)異常和紅細(xì)胞外因素的影響呈現(xiàn)酸溶血現(xiàn)象。
正常值:陰性。
臨床意義:本試驗(yàn)陽(yáng)性見于陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿病人。
?、拚崽牵ㄌ撬┤苎囼?yàn)。原理:陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿病人的紅細(xì)胞膜有缺陷,當(dāng)病人的血液懸浮于等滲的10%蔗糖溶液中時(shí),即發(fā)生滲誘溶血現(xiàn)象。
正常值:正常人不發(fā)生溶血。
臨床意義:幾乎所有陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿病人均可呈陽(yáng)性反應(yīng),故此試驗(yàn)比酸溶血試驗(yàn)敏感。但也可在一些其他類型貧血病人呈弱陽(yáng)性反應(yīng)。⑦紅細(xì)胞葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G-6-PD)活性測(cè)定。原理:G-6-PD在催化6-磷酸葡萄糖轉(zhuǎn)變?yōu)?-磷酸葡萄糖酸過程中,使氧化型輔酶Ⅱ(NADP)還原生成還原型輔酶Ⅱ(NADPH)。還原型輔酶Ⅱ在波長(zhǎng)340nm處有一吸收峰,故可通過單位時(shí)間生成還原型輔酶Ⅱ的量來(lái)測(cè)定G-6-PD活性。
正常值:4.97±1.43μmNADPH/分鐘/克血紅蛋白。
臨床意義:用于確診G-6-PD的缺乏,因G-6-PD缺乏可致NADPH在單位時(shí)間內(nèi)生成減少。
⑧高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn)。原理:高鐵血紅蛋白須依靠還原型輔酶Ⅱ(NADPH)供氫而還原成還原血紅蛋白。在G-6-PD缺乏時(shí),因NADPH生成減少,故高鐵血紅蛋白的還原少于正常。
正常值:>75%。
臨床意義:G-6-PD缺乏時(shí),高鐵血紅蛋白還原率一般低于30%。此法簡(jiǎn)單易行,適用于過篩檢查,但可有假陽(yáng)性反應(yīng)。
?、嶙冃灾榈鞍仔◇w檢查。原理:在抗凝血中加入氧化劑乙酰苯肼,經(jīng)37℃孵育后再用甲紫作活體染色,在G-6-PD缺乏的紅細(xì)胞內(nèi)可出現(xiàn)藍(lán)色變性珠蛋白小體。正常值:含5個(gè)以上變性珠蛋白小體的紅細(xì)胞占0~28%。在G-6-PD缺乏者平均可達(dá)67.8%(45~92%)。
臨床意義:作為檢查G-6-PD缺乏的過篩試驗(yàn)。但缺乏特異性,也可見于不穩(wěn)定血紅蛋白病的紅細(xì)胞。
?、庋t蛋白電泳。原理:大部分異常血紅蛋白的等電點(diǎn)不同,所以在使用不同緩沖液的電泳中的泳動(dòng)速度不同,而形成各種不同的區(qū)帶。故可由電泳圖形鑒別各類異常血紅蛋白的性質(zhì)及其含量。
臨床意義:此檢查為診斷地中海貧血及大多數(shù)異常血紅蛋白(Hbs、Hbc、HbD、HbH)的可靠方法。
?、箟A血紅蛋白(HbF)測(cè)定。原理:血紅蛋白A置于堿性溶液中即發(fā)生變性沉淀,且不能通過濾紙。血紅蛋白F對(duì)堿有較強(qiáng)的耐力,故用堿變性試驗(yàn)可測(cè)定。
正常值:成人血液中血紅蛋白F的含量不超過2%。
臨床意義:β珠蛋白生成障礙性貧血時(shí),HbF顯著增多,醫(yī)學(xué)教|育網(wǎng)|收集整理達(dá)10%以上。在急性白血病和再生障礙性貧血的病人也可輕度增多。
?、t蛋白H包涵體生成試驗(yàn)。原理:血紅蛋白H在體外極易變性和沉淀。使用煌焦油藍(lán)染色,于37℃保溫15分鐘,能使血紅蛋白H在細(xì)胞中形成大小不等,數(shù)量不一,分布不均的深藍(lán)色包涵體。
正常值:陰性。
臨床意義:此試驗(yàn)陽(yáng)性可診斷血紅蛋白H病。不穩(wěn)定血紅蛋白亦可呈陽(yáng)性結(jié)果,但須保溫24小時(shí)。
?、t蛋白c試驗(yàn)。原理:血紅蛋白c病的紅細(xì)胞中可見棒狀或六角形結(jié)晶。當(dāng)細(xì)胞置于3%氯化鈉液中,于37℃溫育1小時(shí)后,帶有Hbc的紅細(xì)胞內(nèi)結(jié)晶體更易顯出。
臨床意義:此試驗(yàn)可協(xié)助診斷血紅蛋白c病。
?、t細(xì)胞鐮變?cè)囼?yàn)。含有血紅蛋白s的紅細(xì)胞在缺氧的情況下,易發(fā)生鐮形變化。用于確診血紅蛋白s病。
異丙醇試驗(yàn)。正常血紅蛋白加入異丙醇孵育于37℃40分鐘后方出現(xiàn)沉淀,而不穩(wěn)定血紅蛋白孵育5分鐘即可出現(xiàn)沉淀。用于診斷不穩(wěn)定血紅蛋白,其診斷價(jià)值高于變性珠蛋白小體檢查。
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