目前最常用的方法是金胺-酚改良抗酸染色法,該法是采用金胺-酚染色法和改良抗酸染色法復染,以提高檢出率和準確性。單用金胺-酚染色法或改良抗酸染色法,其效果均不如復染方法。檢查時,取患者腹瀉的新鮮糞便或經10%福爾馬林固定保存(4℃1個月內)糞便,自然沉淀后用吸管盡可能取底部糞便,于載玻片上涂成糞膜,晾干后先用金胺-酚染色,再用改良抗酸染色法復染。
(一)金胺-酚染色法
1.染液配制
lg/L金胺-酚染色液(第一液):金胺1g,石炭酸5.0g,蒸餾水100ml;3%鹽酸酒精(第二液):鹽酸3ml,95%酒精100ml;高錳酸鉀液(第三液):高錳酸鉀0.5g,蒸餾水100ml。
2.染色步驟
滴加第一液于晾干的糞膜上,10~15分鐘后水洗;滴加第二液,1分鐘后水洗;滴加第三液,1分鐘后水洗;待干后置熒光顯微鏡下觀察。
低倍熒光顯微鏡下,可見卵囊為一圓形小亮點,呈現(xiàn)乳白色熒光。高倍鏡下卵囊呈乳白或略帶綠色,卵囊壁為一薄層,多數(shù)卵囊周圍深染,中央淡染,似環(huán)狀;或深染結醫(yī)學教.育網搜集整理構偏位,有些卵囊全部為深染;但有些標本可出現(xiàn)非特異的熒光顆粒,應注意鑒別。
(二)改良抗酸染色法(modifieD acid-faststain)
1.染液配制
石炭酸復紅染色液(第一液):堿性復紅4g,95%酒精20ml,石炭酸8ml,蒸餾水100ml;10%硫酸溶液(第二液):純硫酸10ml,蒸餾水90ml(邊攪拌邊將硫酸徐徐傾人水中);20g/L孔雀綠液(第三液):20g/L孔雀綠原液1ml,蒸餾水10ml。
2.染色步驟
滴加第一液于糞膜上,1.5~10分鐘后水洗;滴加第二液,1~10分鐘后水洗;滴加第三液,1分鐘后水洗;待干后置顯微鏡下觀察。染色后,卵囊為玫瑰紅色,圓形或橢圓形,背景為綠色。染色(1.5分鐘)和脫色(2分鐘)時間短,卵囊內子孢子邊界不明顯;染色時間長(5~10分鐘),脫色醫(yī)學教.育網搜集整理時間相應延長時,子孢子邊界明顯,卵囊和子孢子均被染成玫瑰紅色,子孢子呈月牙形,共4個,其他非特異顆粒則染成藍黑色,容易與卵囊區(qū)分。
不具備熒光顯微鏡的實驗室,可染色后先在光鏡低、高倍鏡下過篩檢查,見有小紅點時再轉用油鏡觀察,這樣可提高檢出速度和準確性。
(三)金胺-酚改良抗酸染色法
先用金胺-酚染色后,再用改良抗酸染色法復染,然后置光鏡下觀察。卵囊同改良抗酸染色法所見,但非特異性顆粒被染成藍黑色,兩者顏色顯然不同,極易區(qū)別,使檢出率和準確性都明顯提高。