對(duì)流免疫電泳是臨床檢驗(yàn)主管技師考試《臨床免疫學(xué)》要求的考點(diǎn)，為方便考生復(fù)習(xí)，醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)對(duì)對(duì)流免疫電泳知識(shí)點(diǎn)做了整理，希望對(duì)大家復(fù)習(xí)有所幫助。  

原理：

在pH值8.6的瓊脂凝膠中，抗體球蛋白只帶有微弱的負(fù)電荷，而且它分子又較大，所以泳動(dòng)慢，受電滲作用的影響也大，醫(yī)學(xué)/教育網(wǎng)往往不能抵抗電滲作用，故在電泳時(shí)，反而向負(fù)極倒退。而一般抗原蛋白質(zhì)常帶較強(qiáng)的負(fù)電荷，分子又較小，所以泳動(dòng)快，雖然由于電滲作用泳動(dòng)速度減慢，但仍能向正極泳動(dòng)。如將抗原置陰極，抗體置陽(yáng)極，電泳時(shí)，兩種成分相對(duì)泳動(dòng)，一定時(shí)間后抗原和抗體將在兩孔之間相遇，并在比例適當(dāng)?shù)牡胤叫纬扇庋劭梢?jiàn)的沉淀線。這樣由于電泳的作用，不僅幫助抗體定向移動(dòng)，因而加速了反應(yīng)的出現(xiàn)，而且也限制了瓊脂擴(kuò)散時(shí)，抗原抗體向四周自由擴(kuò)散的傾向，因而也提高了敏感性，本法比瓊脂擴(kuò)散法的靈敏度要高10～16倍，而且反應(yīng)時(shí)間短，可用于各種蛋白的定性和半定量測(cè)定。

操作方法：

1.制瓊脂板以pH8.6離子強(qiáng)度0.05巴比妥緩沖液配成1%～1.5%瓊脂凝膠板，厚度2mm～3mm.

2.打孔瓊脂冷卻后，按圖打孔，打成對(duì)的小孔數(shù)列，孔徑0.3cm～0.6cm，孔距0.4cm～1.0cm.挑去孔內(nèi)瓊脂，封底。

3.加樣一對(duì)孔中，一孔加已知（或待測(cè)）抗原，另一孔加待測(cè)（或已知）抗體。

4.電泳將抗原孔置于負(fù)極端。電壓2.5V/cm～6V/cm，或電流強(qiáng)度3mA/cm～5mA/cm，電泳時(shí)間30min～90min.

觀察結(jié)果：

斷電后，將玻板置于燈光下，襯以黑色背景觀察。陽(yáng)性者則在抗原抗體孔之間形成一條清楚致密的白色沉淀線。醫(yī)學(xué)教/育網(wǎng)如沉淀線不清晰，可把瓊脂板放在濕盒中37℃數(shù)小時(shí)或置電泳槽過(guò)夜再觀察。

注意事項(xiàng)：

1.特異性對(duì)照鑒定為了排除假陽(yáng)性反應(yīng)，則在待檢抗原孔的鄰近并列一陽(yáng)性抗原孔，若待檢樣品中的抗原與抗體所形成的沉淀線和陽(yáng)性抗原抗體沉淀線完全融合時(shí)，則待檢樣品中所含的抗原為特異性抗原。

2.當(dāng)抗原抗體在同一介質(zhì)中帶同樣電荷或遷徙相近時(shí)，則電泳時(shí)兩者向著一個(gè)方向泳動(dòng)。故不能用對(duì)流免疫電泳來(lái)檢查。

3.適當(dāng)?shù)碾姖B作用在對(duì)流免疫電泳中是必要的。當(dāng)瓊脂質(zhì)量差時(shí)，電滲作用太大，而使血清中的其它蛋白成分也泳向負(fù)極，造成非特異性反應(yīng)。在某些情況，瓊脂糖由于缺乏電滲作用而不能用于對(duì)流免疫電泳。

4.抗原抗體濃度的比例當(dāng)抗原抗體比例不適合時(shí)，均不能出現(xiàn)明顯可見(jiàn)的沉淀線。所以除了應(yīng)用高效價(jià)的血清外，每份待測(cè)樣品均可做幾個(gè)不同的稀釋度來(lái)進(jìn)行檢查。

以上就是醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)系我變?yōu)榇蠹艺淼膶?duì)流免疫電泳相關(guān)內(nèi)容，更多考試資料和考試資訊請(qǐng)登錄醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)。