在微生物學(xué)中，芽孢桿菌是一類能夠形成抗逆性強(qiáng)的休眠體——芽孢的細(xì)菌。由于芽孢的存在，這類細(xì)菌在常規(guī)染色下不易著色，因此需要采用特殊的染色方法來識別它們。常用的染色技術(shù)包括芽孢染色法和負(fù)染色法。
1. 芽孢染色法：這是一種專門用于檢測細(xì)菌是否產(chǎn)生芽孢的方法。操作步驟大致如下：
   - 首先對涂片進(jìn)行加熱固定。
   - 然后使用孔雀綠等染料進(jìn)行初染，時間約為5分鐘。
   - 接著用水洗去多余染液，并用95%酒精脫色約1-2分鐘。
   - 再次用水清洗以去除酒精。
   - 最后使用番紅（復(fù)紅）作為對比染色劑對菌體進(jìn)行染色，時間為1-2分鐘。
2. 負(fù)染色法：這種方法主要是利用某些化學(xué)物質(zhì)與細(xì)菌細(xì)胞壁成分發(fā)生反應(yīng)形成不溶性沉淀物，從而在顯微鏡下觀察到未被染色的芽孢。
   - 先將待測樣本均勻涂抹于載玻片上并干燥固定。
   - 加入適量的負(fù)染液（如碳酸鈷鉀溶液），放置數(shù)分鐘后傾去多余液體。
   - 用蒸餾水輕輕沖洗，吸干水分后即可直接觀察。
通過上述兩種方法之一處理過的樣品，在光學(xué)顯微鏡下可以清晰地看到芽孢桿菌及其形成的芽孢。通常情況下，菌體被染成紅色或淡紫色，而芽孢則呈現(xiàn)深綠色或其他顏色對比鮮明的狀態(tài)，從而便于區(qū)分和鑒定。