流式細胞儀原理及操作步驟：

流式細胞儀是集單克隆抗體、熒光化學、激光、計算機等高技術(shù)發(fā)展起來的一種先進儀器，已廣泛應用于免疫學、生物化學、生物學、腫瘤學以及血液學等方面的研究和臨床常規(guī)工作。其中檢測人白細胞表面標志可對白血病、淋巴瘤作用迅速正確的診斷，對淋巴細胞群和亞群進行精確分類，還能分離純化某一群或亞群細胞?；罴毎庖邿晒饧夹g(shù)是用于FCM檢測的標本準備，染色后也能在熒光顯微鏡下進行觀察，在某些實驗條件下，活細胞免疫熒光染色后的特異性和敏感性要優(yōu)于滴片固定的常規(guī)間接免疫熒光的結(jié)果醫(yī)學教|育網(wǎng)搜集整理。

（一）原理

活細胞表面保留有較完整的抗原或受體，先用特異性鼠源性單克隆抗體與細胞表面相應抗原結(jié)合，再用熒光標記的第二抗體結(jié)合，根據(jù)所測定的熒光強度和陽性百分率即可知相應抗原的密度和分布。

（二）操作步驟

制備活性高的細胞懸液（培養(yǎng)細胞系、外周血單個核細胞、胸腺細胞、脾細胞等均可用于本法）

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用10%FCSRPMI1640調(diào)整細胞濃度為5×106-1×107/ml

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取40μl細胞懸液加入預先有特異性McAb（5-50μl）的小玻璃管或塑料離心管，再加50μl1∶20（用DPBS稀釋）滅活正常兔血清

↓4℃30min

用洗滌液洗滌2次，每次加洗滌液2ml左右

1000rpm×5min

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棄上清，加入50μl工作濃度的羊抗鼠（或兔抗鼠）熒光標記物，充分振搖↓4℃30min

用洗滌液洗滌2次醫(yī)學|教育網(wǎng)搜集整理，每次加液2ml左右

1000rpm×5min

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加適量固定液（如為FCM制備標本，一般加入1ml固定液，如制片后在熒光顯微鏡下觀察，視細胞濃度加入100-500μl固定液）

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FCM檢測或制片后熒光顯微鏡下觀察（標本在試管中可保存5-7天）