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酶免疫技術(shù)是利用酶催化底物反應(yīng)的生物放大作用，提高特異性抗原-抗體免疫學(xué)反應(yīng)檢測(cè)敏感性的一種標(biāo)記免疫技術(shù)。

（1）酶和酶作用的底物①辣根過(guò)氧化酶（HRP）：是一種糖蛋白，含糖量約18%；分子量為44kD；是一種復(fù)合酶，由主酶（酶蛋白）和輔基（亞鐵血紅素）結(jié)合而成的一種卟啉蛋白質(zhì)。主酶為無(wú)色糖蛋白，在275nm波長(zhǎng)處有最高吸收峰；輔基是深棕色的含鐵卟啉環(huán)，在403nm波長(zhǎng)處有最高吸收峰。在反應(yīng)中H2O2是受氫體底物，DH2無(wú)色的供氫體底物，在HRP的催化下脫氫而顯色，此即HRP作為示蹤物的原理。

②堿性磷酸酶（AP）：是從牛腸粘膜或大腸桿菌中提取。從大腸桿菌提取的最適pH為8.0；用小牛腸粘膜提取的AP最適pH為9.6.③其他的酶：有葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶和脲酶等。

（2）酶標(biāo)記的抗體或抗原：稱為結(jié)合物。制備方法通常有戊二醛交聯(lián)法（包括有一步法和二步法）和過(guò)碘酸鹽氧化法。標(biāo)記抗體的最佳用量：通常采用棋盤滴定法進(jìn)行滴定。

（3）固相載體主要試劑：固相的抗原或抗體、酶標(biāo)記的抗原或抗體和與標(biāo)記酶直接關(guān)聯(lián)的酶反應(yīng)底物。可作固相載體物質(zhì)最常用的是聚苯乙烯。與聚苯乙烯類似的塑料為聚氯乙烯。聚苯乙烯作為ELISA固相載體，載體還包括微孔濾膜和含鐵磁性微粒。聚氯乙烯板的特點(diǎn)為質(zhì)軟板薄，可切割，價(jià)廉、但光潔度不如聚苯乙烯板。聚氯乙烯對(duì)蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值有時(shí)也略高。

（4）免疫吸附劑：固相的抗原或抗體稱為免疫吸附劑。將抗原或抗體固相化的過(guò)程稱為包被。如在包被后再用l%～5%牛血清白蛋白包被一次，可以消除這種干擾。這一過(guò)程稱為封閉。包被好的ELISA板在低溫可放置一段時(shí)間而不失去其免疫活性。