2012年公衛(wèi)醫(yī)師考試在即，醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)收集整理了2012公衛(wèi)執(zhí)業(yè)醫(yī)師考試大綱中基礎(chǔ)知識(shí)的相關(guān)內(nèi)容，供各位考生參考。

在測(cè)定一個(gè)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)以前，首先必須保證被測(cè)蛋白質(zhì)的純度，使結(jié)果準(zhǔn)確可靠。其次要了解它的分子量和亞基數(shù)，按照其亞基數(shù)將蛋白質(zhì)分成幾個(gè)多肽鏈。

蛋白質(zhì)分子多肽鏈的連接有共價(jià)結(jié)合和非共價(jià)結(jié)合兩種。要拆開(kāi)以共價(jià)結(jié)合的-S-S-連接的多肽鏈，必須采用的化學(xué)處理方法常有：

①過(guò)甲酸氧化

用氧化劑過(guò)甲酸斷裂-S-S-.這個(gè)反應(yīng)一般在0℃下進(jìn)行2小時(shí)左右，兩個(gè)S就全部能轉(zhuǎn)變成磺酸基，這樣被氧化的半胱氨酸稱(chēng)為磺基丙氨酸。

如果蛋白質(zhì)分子中同時(shí)存在半胱胺酸，那么也會(huì)被氧化成磺基丙氨酸。此外甲硫氨酸和色氨酸也可被氧化，從而增加分析的復(fù)雜性。

②巰基乙醇還原

利用還原劑巰基乙醇亦可使蛋白質(zhì)的-S-S-斷裂。當(dāng)高濃度的巰基乙醇在pH8？條件下室溫保溫幾小時(shí)后，可以使-S-S-定量還原為桽H.與此同時(shí)反應(yīng)系統(tǒng)中還需要有8摩爾脲或6摩爾鹽酸胍使蛋白質(zhì)變性，多肽鏈松散成為無(wú)規(guī)則的構(gòu)型，此時(shí)還原劑就可作用于-S-S-.此反應(yīng)是可逆的，因此要使反應(yīng)完全醫(yī)`學(xué)教育網(wǎng)整理，疏基乙醇的濃度必需在0.1-0.5摩爾。

③Cleland試劑的還原作用

Cleland′s指出二硫赤蘇糖醇（dithioerythriotol）及二硫蘇糖醇（dithiothriotol）在氧化還原能力上是比較強(qiáng)的試劑，只要0.01摩爾就能使蛋白質(zhì)的-S-S-還原，反應(yīng)基本與疏基乙醇相似，且在許多球蛋白反應(yīng)中，可以不用變性劑。

Cleland試劑首先與蛋白質(zhì)-S-S-形成中間物，反應(yīng)終了，還原劑被氧化形成一個(gè)穩(wěn)定的六環(huán)化合物，蛋白質(zhì)則被還原。

還原蛋白不穩(wěn)定，SH基極易氧化重新生成-S-S-鍵。穩(wěn)定SH基的方法有：

（A）烷基化試劑使SH基轉(zhuǎn)變?yōu)榉€(wěn)定的硫醚衍生物醫(yī)`學(xué)教育網(wǎng)整理。

如果碘代乙酰胺代替碘代乙酸，其產(chǎn)物S羧氨甲基衍生物不帶電荷，磺代乙酸也可與組氨酸、蛋氨酸和賴(lài)氨酸發(fā)生反應(yīng)，但反應(yīng)條件不同，可通過(guò)各種pH及反應(yīng)時(shí)間進(jìn)行控制。

（B）氨乙基化

蛋白質(zhì)分子的幾條肽鏈若以非共價(jià)健結(jié)合，則用尿素、鹽酸胍等變性劑即可拆開(kāi)。蛋白質(zhì)的多肽鏈被拆開(kāi)后，將它分離純化，一般多用凝膠過(guò)濾、離子交換、電泳等方法，茲不贅述。

分離純化后的每條肽鏈還要進(jìn)一步分析其末端。