家畜血吸蟲病查治技術(shù)規(guī)范

1 病原學(xué)診斷（糞便毛蚴孵化法）

1.1 材料準備

1.1.1 水：pH值6.8～7.2，無水蟲和化學(xué)物質(zhì)污染（包括氯氣）的澄清水，否則需作如下處理：有氯氣的自來水應(yīng)在盛器中存放8h以上。河水、池水、井水、雨水等混有水蟲的水加溫至60℃，冷卻后再用。或在5萬ml水中加含30%有效氯的漂白粉0.35g，攪勻，放置20h，待氯氣逸盡；也可在放漂白粉后加入硫代硫酸鈉0.2～0.4g脫氯，0.5h后再用。對混濁的水，于每5萬ml水中加明礬3～5g，充分攪拌，待水澄清后用。

1.1.2 器材、試劑：竹筷、40～80目的銅篩濾杯、260目的尼龍篩兜、500ml量杯、糞桶、放大鏡、顯微鏡、吸管、載玻片、蓋玻片、取暖爐、水溫計、盆、水缸、水桶、剪刀、鬧鐘、天平、300～500ml長頸平底燒瓶或200～250ml三角燒瓶、脫脂棉。

1.1.3 送糞卡：包括村名、組名、飼養(yǎng)員或畜主姓名、畜別、畜名或畜號、性別、年齡、有無孕、采糞日期。

1.1.4 孵育室（箱）。室溫低于20℃時需有保持20～25℃的環(huán)境條件，如有溫箱或有取暖設(shè)備的房間。

1.2 操作方法

1.2.1 采糞和送檢：采糞季節(jié)宜于春秋兩季，其次是夏季，不宜于冬季。采糞的時間最好于清晨從家畜直腸中采取，或新排出的糞便。采糞量：牛、馬屬200g，豬100g，羊和犬糞（農(nóng)家）40g，每份糞樣需附上填好的送糞卡，于采糞當天送到檢驗室。

1.2.2 洗糞和孵化：將每頭家畜的糞便分三份，每份糞量牛、馬50g，豬20g，羊、犬10g.然后根據(jù)實際情況選用下列一種方法進一步操作。

1.2.2.1 尼龍兜淘洗孵化法：糞便在40目銅篩和量杯中用清水淘洗，細糞渣存于500ml量杯中，待沉淀后去上清液，沉渣倒入尼龍兜用水沖淘洗，把尼龍兜中的糞渣裝入三角燒瓶或長頸平底燒瓶中加25℃左右清水，為便于觀察毛蚴，在瓶頸下二分之一處加一塊2～3cm厚的脫脂棉，再加清水至瓶口。

1.2.2.2 塑料杯頂管法：置糞于銅篩量杯中加水充分淘洗，棄去糞篩量杯中的上層水，倒去三分之二，加25℃清水，蓋上中間有孔的塑料蓋再加滿25℃清水，再將盛滿水的試管口塞一塊2～3cm厚的脫脂棉，倒插入塑料蓋孔中。

1.2.3 孵育：上述兩種方法裝好的三角燒瓶、長頸燒瓶或塑料杯放于20～25℃的箱（室）中，在一定的光照（日光或燈光）條件下進行孵育。從孵育開始到1、3、5h后各觀察一次，尾蚴多數(shù)在水面下2mm范圍內(nèi)呈直線運動。發(fā)現(xiàn)血吸蟲毛蚴即判定為陽性。血吸蟲毛蚴肉眼觀察為針尖大小、灰白色、梭形、折光強和水中其他小蟲不同之處是在近水面作水平或斜向直線運動，當用肉眼觀察難與水中的其他小蟲相區(qū)別時，可用滴管將毛蚴吸出，置顯微鏡下可見毛蚴前部寬，前段中間有個頂突，兩側(cè)對稱，后漸窄，周身有纖毛則可判為血吸蟲毛蚴。在一個樣品中有1～5個毛蚴為＋，6～10個毛蚴為＋＋，11～20個毛蚴為＋＋＋，21個毛蚴以上為＋＋＋＋。以判斷、統(tǒng)計血吸蟲病感染的強度。

2 家畜血吸蟲病血清學(xué)診斷（間接血凝試驗）

2.1 材料準備

2.1.1 器材：V型微孔有機玻璃血凝板（孔底角90°），25μl定量移液器，滴管，可插針頭的滴管或1～2ml注射器，12號針頭。

2.1.2 生理鹽水、蒸餾水。

2.1.3 診斷液和陰、陽性血清：按說明書處理和保藏。

2.2 操作方法

2.2.1 用滴管滴4滴生理鹽水于血凝板左邊第1孔內(nèi)，用同一滴管加入被檢血清1滴，使血清成5倍稀釋。

2.2.2 用帶12號針頭滴管或移液管在左邊第2、3孔中各加生理鹽水1滴（25μl）。

2.2.3 用移液器將第1孔血清混勻，混勻方法是反復(fù)吸吹三次，然后吸25μl已混勻液加入右邊鄰孔中，此孔血清成1：10稀釋。

2.2.4 用移液器和7.2.2.3一樣混勻第2孔血清，吸取25μl加入第3孔中，此時該孔血清成1：20稀釋。

2.2.5 用移液器和7.2.2.4一樣混勻第3孔血清，吸取25μl丟棄。

2.2.6 每份被檢血清和陽、陰性血清按同樣方法用3個孔，也可不用陰性血清而設(shè)生理鹽水對照孔，此時另取2個孔各加25μl生理鹽水作空白對照。

2.2.7 用帶12號針頭的滴管或移液管加入1：10、1：20血清稀釋孔及空白對照孔各1滴診斷液，使診斷液和血清混勻，置20℃～37℃條件下1～2h，等空白或陰性血清對照孔中血球全部沉于孔底中央，呈一圓形紅點，且陽性血清兩孔中血球沒有全部沉入孔底中央即無圓形紅點或僅有很小的圓形紅點即可判定結(jié)果。

2.3 判定

2.3.1 判定標準

2.3.1.1 紅血球全部下沉到孔底中央，形成緊密紅色圓點，周緣整齊為陰性（-）。

2.3.1.2 紅血球少量沉于孔底中央，形成一較陰性小的紅色圓點，周圍有少量凝集紅血球為弱陽性（＋）。

2.3.1.3 紅血球約半數(shù)沉于孔底中央，形成一更小紅色圓點，周圍有一層淡紅色凝集紅血球為陽性（＋＋）。

2.3.1.4 紅血球均勻地分散于孔底，形成一淡紅色薄層為強陽性（＋＋＋）。

2.3.2 結(jié)果判定：以血清10倍和20倍稀釋孔出現(xiàn)2.3.1.2、3、4的凝集現(xiàn)象時，被檢血清判為陽性。

2.3.3 如陰性或生理鹽水對照孔2h后紅細胞沉淀圖像不標準，說明生理鹽水質(zhì)量不合標準或血凝板孔未洗凈，需檢查原因，重新操作。

3 家畜血吸蟲病的治療

3.1 治療對象的確定

凡用血清學(xué)或病原學(xué)方法查出的陽性畜，經(jīng)健康檢查除列為緩治或不治的病畜外，均應(yīng)進行治療。

3.2 緩治或不治對象

3.2.1 懷孕6個月以上和哺乳期母牛以及3月齡以內(nèi)的犢?？删徶?。

3.2.2 有急性傳染病、心血管疾病或其他嚴重疾病的牛緩治或不治或建議淘汰。

3.2.3 年老體弱喪失勞力或生產(chǎn)能力的病牛建議淘汰。

3.3 稱重或估重

在有條件的情況下，盡可能稱重，以便準確計算用藥量，無稱重條件時則可采用測量估重。

3.4 病畜治療記錄

最好以縣（市）為單位統(tǒng)一印制病畜治療記錄表。對已確定的治療對象，要認真填寫治療登記表。在治療過程中要認真作好記錄，治療結(jié)束后，要整理成冊，歸檔備查。

3.5 治療的藥物和方法

3.5.1 藥物：當前用于治療血吸蟲病病畜的首選藥物是吡喹酮，其粉劑、片劑或其他劑型一次口服治療各種家畜均可達到99.3～100%的殺蟲效果。

3.5.2 劑量：因病畜種類不同和藥物劑量不同其用藥量也不盡相同。黃牛（奶牛）30mg/㎏（限重300㎏），水牛25 mg/㎏（限重400㎏），羊20 mg/㎏，豬60 mg/㎏，馬屬動物參照水牛或羊的劑量。

3.6 藥物反應(yīng)及處理

吡喹酮一次口服療法治療家畜血吸蟲病，一般無副反應(yīng)或輕微反應(yīng)，副反應(yīng)主要表現(xiàn)為反芻減少，食欲減退，瘤胃臌氣，流涎，拉稀，心跳加快，精神沉郁，嚴重時可引起流產(chǎn)，也見有出現(xiàn)牛死亡的報告。

反應(yīng)處理：一般輕微反應(yīng)不需特殊處理，少數(shù)病例特別是老弱病畜或奶?？赡艹霈F(xiàn)奶產(chǎn)量下降等反應(yīng)，應(yīng)加強觀察，采用對癥療法，即可康復(fù)。