方法名稱： 維生素K1的測定—高效液相色譜法

應用范圍： 本方法采用高效液相色譜法測定維生素K1的含量。

本方法適用維生素K1。

方法原理： 供試品和內標均制成流動相溶液，進入高效液相色譜儀進行色譜分離，用紫外吸收檢測器，于波長254nm處檢測維生素K1（C31H46O2）和內標鄰苯二甲酸二甲酯的吸收值，計算出其含量。

試劑： 1.石油醚

2. 正己烷

儀器設備： 1. 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

硅膠為填充劑，維生素K1的順、反式異構體之間及順式異構體峰與內標物質峰的分離度應符合要求。

1.3 紫外吸收檢測器

2. 色譜條件

2.1 流動相：正己烷+石油醚=2.5 2000

2.2 檢測波長：254nm

2.3 柱溫：室溫

試樣制備： 1. 稱取供試品

取本品20mg，精密稱定，置50mL量瓶中。

2. 對照品溶液的制備

精密稱取維生素K1對照品適量，與供試品同法配制。

3. 內標溶液的制備

取苯甲酸膽甾酯37.5mg，置25mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，即得。

4. 供試品溶液的制備

上述供試品加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取上述溶液5mL與內標溶液各1mL，置10mL量瓶中，以流動相稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應準確至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準確度應符合國家標準中對該體積移液管的精度要求。

操作步驟： 分別精密吸取上述供試品溶液與對照品溶液，10μL 注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器，于波長254nm處測定維生素K1和內標苯甲酸膽甾酯的吸收值，按內標法以峰面積計算，即得。

參考文獻： 中華人民共和國藥典，國家藥典委員會編，化學工業(yè)出版社，2005年版，二部，p676。