方法名稱：

鹽酸去甲萬古霉素的測定—高效液相色譜法

應(yīng)用范圍：

本方法采用高效液相色譜法測定鹽酸去甲萬古霉素（C65H73Cl2N9O24 ·HCl）的含量。

本方法適用于鹽酸去甲萬古霉素。

方法原理：

供試品加水溶解并定量稀釋，進入高效液相色譜儀進行色譜分離，用紫外吸收檢測器，于波長280nm處檢測鹽酸去甲萬古霉素吸收值，計算出其含量。

試劑：

1. 三乙胺緩沖液

2. 乙腈

3. 四氫呋喃

儀器設(shè)備：

1. 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論塔板數(shù)按去甲萬古霉素峰計算不低于1500。

1.3 紫外吸收檢測器

2. 色譜條件

2.1 流動相：梯度洗脫，見下表：

流動相A：三乙胺緩沖液 乙腈 四氫呋喃=96 3 1

流動相B：三乙胺緩沖液 乙腈 四氫呋喃=70 29 1

時間（分鐘）

流動相A（%）

流動相B（%）

0

100

0

23

100

0

38

0

100

40

0

100

41

100

0

50

100

0

2.2 檢測波長：280nm

2.3 柱溫：室溫

試樣制備：

1. 三乙胺緩沖液

取三乙胺6mL，加水2000mL，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.2

2. 稱取供試品

精密稱取本品適量。

3. 對照品溶液的制備

精密稱取適量，加水溶解并制成每1mL含1.0mg的溶液，搖勻，即得。

4. 供試品溶液的制備

將供試品加水使溶解后，并制成每1mL含1.0mg的溶液，搖勻，即得。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對該體積移液管的精度要求。

操作步驟：

分別精密吸取上述對照品溶液與供試品溶液各20μL 注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器，于波長280nm處測定去甲萬古霉素的吸收值，計算出其含量。

參考文獻：

中華人民共和國藥典，國家藥典委員會編，化學(xué)工業(yè)出版社，2005年版，二部，p.467。