方法名稱： 葉酸片－葉酸－高效液相色譜法

應用范圍： 本方法采用高效液相色譜法測定葉酸片中葉酸的含量。

本方法適用于葉酸片。

方法原理： 供試品研細，經氨溶液溶解后，用水定量稀釋，進入高效液相色譜儀進行色譜分離，用紫外吸收檢測器，于波長254nm處檢測葉酸的峰面積，計算出其含量。

試劑： 1 .甲醇

2. 磷酸二氫鉀

3. 0.1mol/L氫氧化鉀溶液

4. 0.5%氨溶液

儀器設備： 1. 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑。

1.3 紫外吸收檢測器

2. 色譜條件

2.1 流動相：以磷酸二氫鉀6.8g與0.1mol/L氫氧化鉀溶液70mL，加水稀釋至850mL，并調節(jié)pH值至6.3±0.1，加甲醇80mL，用水稀釋成1000mL的溶液

2.2 檢測波長：254nm

2.3 柱溫：室溫

試樣制備： 1. 對照品溶液的制備

精密稱取葉酸對照品約5mg，置25mL量瓶中，加0.5%氨溶液約15mL溶解后，用水稀釋至刻度，搖勻，即為對照品溶液。

2. 供試品溶液的制備

取本品50片（0.4mg規(guī)格）或20片（5mg規(guī)格），精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于葉酸5mg），置25mL量瓶中，加0.5%氨溶液約15mL，置熱水浴中加熱20分鐘，時時振搖使葉酸溶解，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過，續(xù)濾液即為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應準確至所稱取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準確度應符合國家標準中對該體積移液管的精度要求。

操作步驟： 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20mL，注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器于波長254nm處測定葉酸（C19H19N7O6）的峰面積，計算出其含量。

參考文獻： 中華人民共和國藥典，國家藥典委員會編，化學工業(yè)出版社，2005版，一部，p.109。