方法名稱：三黃片—鹽酸小檗堿的測(cè)定—高效液相色譜法

應(yīng)用范圍：該方法采用高效液相色譜法測(cè)定三黃片中鹽酸小檗堿的含量。

該方法適用于由大黃、鹽酸小檗堿和黃芩浸膏等組成的片劑。

方法原理：三黃片由大黃、黃芩浸膏和鹽酸小檗堿組成，是一種具有清熱瀉火、消炎利便功效的常用中成藥。收載于《中國藥典》2000年版一部。其中鹽酸小檗堿的含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)未作規(guī)定。目前文獻(xiàn)報(bào)道的測(cè)定方法有薄層掃描法、脈沖極譜法、分光光度法、示波極譜法和離子選擇電極法等。

該方法為高效液相色譜法，紫外吸收檢測(cè)器于波長347nm處檢測(cè)鹽酸小檗堿的吸收值，外標(biāo)法計(jì)算含量。本法操作簡便、精密度高、分離效果良好。

試劑：鹽酸小檗堿對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，713 9204）；乙腈為色譜純，水為高純水，甲醇、三乙胺、磷酸為分析純；三黃片為市售品。

儀器設(shè)備：1 儀器

1.1儀高效液相色譜儀，紫外檢測(cè)器，色譜工作站

1.2 色譜柱

色譜柱：KF C18（250mm×4.6mm,10μm,中國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所），柱溫：室溫

1.3 紫外吸收檢測(cè)器

2 色譜條件

2.1 流動(dòng)相：乙腈 0.05mol·L-1三乙胺溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)=35 65；流速：1.0mL·min-1

2.2 檢測(cè)波長：347nm，進(jìn)樣量：20μL。

試樣制備：1. 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加流動(dòng)相制成36μg·ml-1的對(duì)照品溶液。

2.供試品溶液的制備

取該品20片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于鹽酸小檗堿1.8mg），置50ml量瓶中，加流動(dòng)相適量，超聲處理5min，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，再經(jīng)0.45μm的微孔濾膜濾過后，即得。取大黃粉、黃芩浸膏和其它輔料，按處方比例同法制得三黃片陰性空白溶液。

操作步驟：1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別吸取上述對(duì)照品溶液1，2，3，4，5，6ml，分別置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，進(jìn)樣10μl測(cè)定，以鹽酸小檗堿的進(jìn)樣量（μg) 為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，得回歸方程

2. 供試品的測(cè)定

精密吸取供試品溶液10μL注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長347nm處測(cè)定吸收值，計(jì)算出其含量。

參考文獻(xiàn)：周文梟，曾立威，劉偉林. HPLC 測(cè)定三黃片中鹽酸小檗堿的含量.華西藥學(xué)雜志，2004，19（3）：220-221

李小燕.HPLC法測(cè)定三黃片中鹽酸小檗堿的含量. 中成藥，2002， 24（9）：679-680