方法名稱：

黃體酮注射液—液黃體酮的測定—高效液相色譜法

應(yīng)用范圍：

本方法采用高效液相色譜法測定黃體酮注射液中黃體酮的含量。

本方法適用黃體酮注射液。

方法原理：

供試品和內(nèi)標(biāo)均制成甲醇溶液，進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測器，于波長254nm處檢測黃體酮（C21H30O2）和內(nèi)標(biāo)己烯雌酚的吸收值，計算出其含量。

試劑：

1. 甲醇

2. 乙醚

儀器設(shè)備：

1. 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論板數(shù)按黃體酮峰計算應(yīng)不低于 1000，黃體酮峰與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。

1.3 紫外吸收檢測器

2. 色譜條件

2.1 流動相：甲醇＋水= 65 35

2.2 檢測波長：254nm

2.3 柱溫：室溫

試樣制備：

1. 量取供試品

用內(nèi)容量移液管精密量取本品適量（約相當(dāng)于黃體酮50mg），置50mL量瓶中。

2. 對照品溶液的制備

精密稱取黃體酮對照品適量，加甲醇溶解并稀釋成溶液。

3. 內(nèi)標(biāo)溶液的制備

取己烯雌酚25mg，置25mL量瓶中，加稀甲醇溶解并稀釋至刻度，即得。

4. 供試品溶液的制備

上述供試品用乙醚分?jǐn)?shù)次洗滌移液管內(nèi)壁，洗液并入量瓶中，加乙醚稀釋至刻度，搖勻；精密量取5mL置具塞離心管中，在溫水浴內(nèi)使乙醚揮散；用甲醇振搖提取4次（第1~3次各5mL，第4次3mL），每次振搖10分鐘后，離心15分鐘，并用滴管將甲醇移置25mL量瓶中，合并提取液，精密加內(nèi)標(biāo)溶液5mL，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對該體積移液管的精度要求。

操作步驟：

分別精密吸取上述供試品溶液和對照品溶液5μL 注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器，于波長254nm處測定黃體酮和內(nèi)標(biāo)己烯雌酚的吸收值，按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計算，即得。

參考文獻(xiàn)：

中華人民共和國藥典，國家藥典委員會編，化學(xué)工業(yè)出版社，2005年版，二部，p643。