一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?

1.學(xué)會(huì)吸收曲線(xiàn)及標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制，了解分光光度法的基本原理；

2.掌握用鄰二氮菲分光光度法測(cè)定微量鐵的方法原理；

3.學(xué)會(huì)722型分光光度計(jì)的正確使用，了解其工作原理；

4.學(xué)會(huì)數(shù)據(jù)處理的基本方法；

5.掌握比色皿的正確使用。

二、實(shí)驗(yàn)原理

根據(jù)朗伯-比耳定律：A=εbc，當(dāng)入射光波長(zhǎng)λ及光程b一定時(shí)，在一定濃度范圍內(nèi)，有色物質(zhì)的吸光度A與該物質(zhì)的濃度c成正比。只要繪出以吸光度A為縱坐標(biāo)，濃度c為橫坐標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，測(cè)出試液的吸光度，就可以由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)查得對(duì)應(yīng)的濃度值，即未知樣的含量。同時(shí)，還可應(yīng)用相關(guān)的回歸分析軟件，將數(shù)據(jù)輸入計(jì)算機(jī)，得到相應(yīng)的分析結(jié)果醫(yī)\學(xué)教育網(wǎng)搜集整理。

用分光光度法測(cè)定試樣中的微量鐵，可選用的顯色劑有鄰二氮菲（又稱(chēng)鄰菲啰啉）及其衍生物、磺基水楊酸、硫氰酸鹽等。而目前一般采用鄰二氮菲法，該法具有高靈敏度、高選擇性，且穩(wěn)定性好，干擾易消除等優(yōu)點(diǎn)。

在pH=2～9的溶液中，F(xiàn)e²⁺與鄰二氮菲（phen）生成穩(wěn)定的桔紅色配合物Fe（phen）₃²⁺，

此配合物的lgK穩(wěn)=21.3，摩爾吸光系數(shù)ε510=1.1×104L·mol-1·cm-1，而Fe3+能與鄰二氮菲生成3∶1配合物，呈淡藍(lán)色，lgK穩(wěn)=14.1。所以在加入顯色劑之前，應(yīng)用鹽酸羥胺（NH2OH·HCl）將Fe3+還原為Fe2+，其反應(yīng)式如下：

三、儀器與試劑

儀器：722型分光光度計(jì)、容量瓶（100mL，50mL）、吸量管

試劑：硫酸鐵銨NH4Fe（SO4）2·12H2O（s）（A.R.）、硫酸（3mol·L-1）、鹽酸羥胺（10%）、NaAc（1mol·L-1）、鄰二氮菲（0.15%）。

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