（1）β-半乳糖苷酶試驗原理：有的細菌可產(chǎn)生β-半乳糖苷酶，能分解鄰-硝基酚-β-D-半乳糖苷（ONPG），而生成黃色的鄰-硝基酚，在很低濃度下也可檢出。

　　（2）試劑：0.75M ONPG溶液：取80mg溶于15ml蒸餾水中，在加入緩沖液（6.9g NaH₂P0₄溶于45ml蒸餾水中，用30% NaOH調(diào)整pH為7.0，再加水至50ml）5ml，置4℃冰箱中保存。0NPG溶液為無色，如出現(xiàn)黃色，則不應再用。

　　（3）方法：從克氏雙糖鐵培養(yǎng)基上取菌，于0.25ml無菌生理鹽水中制成菌懸液，加入一滴甲苯并充分振搖，使酶釋放。將試管置37℃水浴5min，加入0.25ml ONPG試劑，水浴20min～3h觀察結(jié)果。

　　（4）結(jié)果：菌懸液呈現(xiàn)黃色為陽性反應，一般在20～30min內(nèi)顯色醫(yī)學教|育網(wǎng)搜集整理。

　　（5）應用：迅速及遲緩分解乳糖的細菌ONPG試驗為陽性，而不發(fā)酵乳糖的細菌為陰性。本實驗主要用于遲緩發(fā)酵乳糖菌株的快速鑒定。