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醋酸纖維素薄膜電泳法

2011-05-31 20:45 醫(yī)學教育網
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  (1)醋酸纖維素薄膜

  取醋酸纖維素薄膜,裁成2cm×8cm的膜條,將無光澤面向下,浸入巴比妥緩沖液(pH8.6)中,待完全浸透,取出夾于濾紙中,輕輕吸去多余的緩沖液后,將膜條無光澤面向上,置電泳槽架上,經濾紙橋浸入巴比妥緩沖液(pH8.6)中。

  (2)點樣與電泳

  于膜條上距負極端2cm處,條狀滴加蛋白含量約5%的供試品溶液2~3μl,在10~12V/cm電位梯度下電泳。電泳區(qū)帶距離以4~5cm為宜。

  (3)染色

  電泳完畢,將膜條取下浸于氨基黑染色液中,2~3分鐘后,用漂洗液浸洗數(shù)次,直至脫去底色止止。

  (4)透明

  將洗凈并完全干后的膜條浸于透明液中10~15分鐘,取出平鋪于潔凈的玻板上,干后即成透明薄膜,可于分光光度計上測定和作標本長期保存。

  (5)含量測定

  未經透明處理的醋酸纖維素薄膜電泳圖可按各藥品項下規(guī)定的方法測定,一般采用洗脫法或掃描法,測定各蛋白質組分的相對含量(1%)。

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