當(dāng)一束強度為I0的單色光垂直照射某物質(zhì)的溶液后，由于一部分光被體系吸收，因此透射光的強度降至I，則溶液的透光率T為：

根據(jù)朗伯（Lambert）-比爾（Beer）定律：A=abc

式中A為吸光度，b為溶液層厚度（cm），c為溶液的濃度（g/dm^3）， a為吸光系數(shù)。其中吸光系數(shù) 與溶液的本性、溫度以及波長等因素有關(guān)。溶液中其他組分（如溶劑等）對光的吸收可用空白液扣除。

由上式可知，當(dāng)溶液層厚度b和吸光系數(shù)a固定時，吸光度A與溶液的濃度成線性關(guān)系。在定量分析時，首先需要測定溶液對不同波長光的吸收情況（吸收光譜），從中確定最大吸收波長 ，然后以此波長 的光為光源，測定一系列已知濃度c溶液的吸光度A，作出A～c工作曲線。在分析未知溶液時，根據(jù)測量的吸光度A，查工作曲線即可確定出相應(yīng)的濃度。這便是分光光度法測量濃度的基本原理。