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10月25日 19:00-21:00
詳情10月28日 16:00-18:00
詳情霍亂弧菌的檢測方法:
1.生化鑒定:
新從病人分離出古典型霍亂弧菌和ELtor弧菌比較典型,為革蘭氏陰性菌,菌體彎曲呈弧狀或逗點狀,菌體一端有單根鞭毛和菌毛,無莢膜與芽胞。經(jīng)人工培養(yǎng)后,易失去弧形而呈桿狀。取霍亂病人米泔水樣糞便作活菌懸滴觀察,可見細(xì)菌運動極為活潑,呈流星穿梭運動。營養(yǎng)要求不高,在PH8.8~9.0的堿性蛋白胨水或平板中生長良好。因其他細(xì)菌在這一PH不易生長,故堿性蛋白胨水可作為選擇性增殖霍亂弧菌的培養(yǎng)基。在堿性平板上菌落直徑為2mm,圓形,光滑,透明。
霍亂弧菌能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽,靛基質(zhì)反應(yīng)陽性,當(dāng)培養(yǎng)在含硝酸鹽及色氨酸的培養(yǎng)基中,產(chǎn)生靛基質(zhì)與亞硝酸鹽,在濃硫酸存在時,生成紅色,稱為霍亂紅反應(yīng),但其他非致病性弧菌亦有此反應(yīng),故不能憑此鑒定霍亂弧菌。EL Tor型霍亂弧菌與古典型霍亂弧菌生化反應(yīng)有所不同。前者Vp陽性而后者為陰性。前者能產(chǎn)生強烈的溶血素,溶解羊紅細(xì)胞,在血平板上生長的菌落周圍出現(xiàn)明顯的透明溶血環(huán),古典型霍亂弧菌則不溶解羊紅細(xì)胞。個別EL Tor型霍亂弧菌株亦不溶血。
2.血清凝集法:
根據(jù)弧菌O抗原不同,分成Ⅵ個血清群,第Ⅰ群包括霍亂弧菌的兩個生物型。第Ⅰ群A、B、C三種抗原成份可將霍亂弧菌分為三個血清型:含AC者為原型(又稱稻葉型),含AB者為異型(又稱小川型),A、B、C均有者稱中間型(彥島型)。
1992年10月在印度東南部又發(fā)現(xiàn)了一個引起霍亂流行的新血清型菌株,它引起的霍亂在臨床表現(xiàn)及傳播方式上與古典型霍亂完全相同,但不能被01群霍亂弧菌診斷血清所凝集,抗01群的抗血清對0139菌株無保護(hù)性免疫。在水中的存活時間較01群霍亂弧菌長,因而有可能成為引起世界性霍亂流行的新菌株,推薦使用天津生物芯片生產(chǎn)的霍亂弧菌診斷血清。
3.聚合酶鏈反應(yīng)法:
1)普通聚合酶鏈反應(yīng)法。
核酸擴(kuò)增技術(shù),即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),其基本原理是設(shè)計、合成兩條寡核苷酸,作為引物,對應(yīng)于待測病原微生物某一段特異性序列的兩端,然后在體外模擬DNA體內(nèi)復(fù)制的過程反復(fù)擴(kuò)增,使靶序列放大上萬倍甚至上百萬倍而被檢測出來。一般選擇霍亂腸毒素基因ctx的保守序列作為靶基因。一些非產(chǎn)毒株(如環(huán)境來源的菌株)有可能通過基因水平轉(zhuǎn)移獲得毒力基因成為產(chǎn)毒株,若僅檢測ctx基因容易造成漏檢。因此,霍亂弧菌的其他重要基因,如毒力協(xié)同調(diào)節(jié)菌毛A基因(tcp A)、o抗原基因(rfb)、外膜蛋白基因(omp)以及毒力表達(dá)調(diào)控基因(toxR)等也被選用為PcR的靶基因,這大大提高了檢測的特異度。
2 )多重PCR法。
與常規(guī)PCR相比,多重PCR一次反應(yīng)可檢測多個基因,節(jié)省了時間和成本。國內(nèi)、外許多學(xué)者選用霍亂弧菌的毒素基因ctx、tcp與其他基因如ompW、rfb、hly進(jìn)行組合,作為共同的靶基因,克服了由于毒力基因特異度不夠高而造成的假陽性。多重PcR同時可準(zhǔn)確區(qū)分不同血清型的霍亂弧菌和快速鑒定其是否為產(chǎn)毒株,可謂一舉多得,大大提高了檢測效率。
3)熒光定量PCR法。
熒光定量PCR自動化程度高、特異性強、無交叉污染,在霍亂弧菌的快速診斷中得到廣泛應(yīng)用。尤其是近年來,隨著引物與探針的設(shè)計更精確、多通道熒光PCR儀的開發(fā)與廣泛使用,多重?zé)晒舛縋CR技術(shù)日臻成熟,并以其高通量、低成本、高效率等優(yōu)點而廣泛應(yīng)用于病毒、細(xì)菌、真菌等多種病原體的快速檢測,成為應(yīng)用的熱點。
4.基因芯片:
與PCR方法相比,基因芯片技術(shù)能同時獲得更多病原學(xué)、生物學(xué)方面的信息,從而更為全面地分析、掌握病原微生物的特征。Vora等[12]運用基因芯片技術(shù)對多種致病性弧菌的毒力、毒素、耐藥基因及潛在的毒力基因進(jìn)行全面分析,對掌握這些細(xì)菌的致病性及進(jìn)行有效預(yù)防、控制等具有重要意義。醫(yī)學(xué).教育網(wǎng)整理但基因芯片成本較高,距離推廣應(yīng)用尚需時間等待
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