紅霉素軟膏系由紅霉素和軟膏基質(zhì)加工制成的外用抗菌素，是目前臨床常用于膿皰瘡等化膿性皮膚病及小面積燒傷、潰瘍面的感染。中國藥典2000年版采用抗生素微生物檢定法測(cè)定其含量，該方法周期長，操作繁瑣，影響因素較多。本文介紹的高效液相色譜法，采用優(yōu)化的色譜條件，使紅霉素軟膏的含量測(cè)定操作簡(jiǎn)便，專屬性高，重現(xiàn)性好，可以替代微生物檢定法。

儀器與試藥

A gilent LC1100 高效液相色譜儀，A gilent LC1100 自動(dòng)進(jìn)器，A gilent LC1100 紫外檢測(cè)器,，依利特色譜柱（大連依利特科學(xué)儀器有限公司， 填料:：sinoch rom ODS2BP 5Lm; 416mm ×250mm ） ，A gilent LC1100 數(shù)據(jù)處理儀。紅霉素對(duì)照品由中國藥品生物制品檢定所（批號(hào): 0307-9713） ；紅霉素軟膏3 批（批號(hào)031005、031216、040513） ，規(guī)格乙腈為色譜純；磷酸二氫銨、三乙胺為分析純,，水為超純水。

方法與結(jié)果

固定相：十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動(dòng)相：011mol·L - 1磷酸二氫銨溶液（三乙胺調(diào)節(jié)pH615） 2乙腈（70:30） ；流速110m l·m in- 1；檢測(cè)波長210nm；進(jìn)樣量20LL。在上述條件下，測(cè)得紅霉素對(duì)照品溶液色譜圖， 紅霉素的保留時(shí)間約為615m in，與雜質(zhì)峰的分離度均大于115 。

對(duì)照品溶液的制備

精密稱取紅霉素對(duì)照品325mg，置50mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，配成對(duì)照品貯備液,再精密量取2mL置25mL量瓶中，加流動(dòng)相配制成每1mL含紅霉素015mg的對(duì)照品溶液。

供試品溶液的制備

精密稱取樣品5g，置分液漏斗中，加石油醚80mL，緩緩振搖,使其質(zhì)溶解，用磷酸鹽緩沖液（pH615）提取4次，每次約25mL，合并提取液，置100mL量瓶中，用磷酸鹽緩沖液（pH615）稀釋至刻度,搖勻，配制成每1mL含紅霉素015mg的供試品溶液。

線性關(guān)系

分別精密量取上述對(duì)照品貯備液015、110、210、410、810、1210、1610mL至25mL量瓶中,加流動(dòng)相至刻度。分別進(jìn)樣20LL ，記錄色譜圖。以峰面積（Y） 對(duì)進(jìn)樣量（X）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為:：Y= 32798+ 95934X, r= 019999。結(jié)果表明，紅霉素在進(jìn)樣量310～ 80Lg 的范圍內(nèi)，峰面積與進(jìn)樣量之間呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)

取試驗(yàn)用對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5 次，記錄色譜峰面積， RSD 為0155%。溶液穩(wěn)定性

取試驗(yàn)用供試品溶液在室溫放置，分別于0、1、3、5h取20LL 進(jìn)樣，記錄色譜峰面積，RSD 為0113%。

結(jié)果討論

檢測(cè)波長的選擇

取紅霉素對(duì)照品用流動(dòng)相溶解并制成每1mL中含015mg的溶液，在190nm～300nm的波長范圍內(nèi)掃描,在210nm的波長處有最大吸收，因此選擇210nm為檢測(cè)波長。流動(dòng)相的選擇

在實(shí)驗(yàn)過程中，選擇不同鹽濃度和不同pH值的流動(dòng)相進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)鹽濃度的增加可改善紅霉素與有關(guān)物質(zhì)的分離度，流動(dòng)相pH值的提高也可改善紅霉素與有關(guān)物質(zhì)的分離度，考慮到對(duì)色譜柱的損耗。故選用用011mol·L-1磷酸二氫館溶液（三乙胺調(diào)節(jié)pH615）2乙腈（70∶30）作為流動(dòng)相。

用HPLC法測(cè)定紅霉素的含量,準(zhǔn)確性及重現(xiàn)性均較好，且操作簡(jiǎn)便，HPLC法與微生物檢定法進(jìn)行比較，測(cè)定結(jié)果基本一致，因此可以用HPLC法替代微生物檢定法測(cè)定紅霉素含量。