蛋白質(zhì)型：

　　蛋白質(zhì)型手性色譜柱屬于第5種類型。分離依賴于疏水相互作用和極性相互作用。已經(jīng)有多種蛋白質(zhì)用于此類手性色譜柱。目前使用較多的是α-酸性糖蛋白（α-Acid Glycoprotein，AGP），人血清白蛋白（Human Serum Albumin，HSA），牛血清白蛋白（Bovine Serum Albumin，BSA）和卵類粘蛋白（Ovomucoid，OV）。

　　α-酸性糖蛋白分子由181個氨基酸殘基和40個唾液酸（sialic acid） 殘基構(gòu)成。α-酸性糖蛋白分子偏酸性，等電點(diǎn)為2.7。含有兩個二硫鍵，性質(zhì)很穩(wěn)定。α-酸性糖蛋白分子可以共價(jià)鍵合到硅膠上，制成手性色譜柱，可以分離許多化合物。

　　α-酸性糖蛋白手性色譜柱使用的流動相通常為pH 4-7的磷酸鹽緩沖液和很小比例的有機(jī)相。有機(jī)相首選異丙醇，如達(dá)不到分離要求，可以嘗試乙腈，乙醇，甲醇或四氫呋喃。有機(jī)相的改變導(dǎo)致蛋白結(jié)構(gòu)發(fā)生暫時的改變。色譜柱的負(fù)載量至關(guān)重要，典型的負(fù)載量為0.02mg/ml的濃度樣品，進(jìn)樣20μl。pH 的改變對手性選擇性起關(guān)鍵作用，尤其是胺類化合物。pH降低導(dǎo)致蛋白質(zhì)負(fù)電荷的降低，引起胺類化合物保留時間減小，然而這意味著可以減小有機(jī)相比例，使選擇性增加，峰形改善。

　　通過調(diào)節(jié)有機(jī)相比例仍無法達(dá)到分離效果時，有時需用電荷調(diào)節(jié)劑。但這可能引起蛋白結(jié)構(gòu)的永久改變，這些電荷調(diào)節(jié)劑包括丁酸、辛酸、癸酸和二甲基辛胺。有時也用到1，2 亞乙基二醇，1，2丁醇和氯化鈉。溫度對分離也有影響，溫度增加保留時間，減小分離因子。

　　人血清白蛋白（HSA）分子量為69,000，等電點(diǎn)為4.8。蛋白中認(rèn)為存在兩個藥物結(jié)合位點(diǎn)：華法令-氮雜普魯帕宗（warfarin-azapropazone） 和苯基二氮雜-吲哚（benzodiazapine-indole）結(jié)合位點(diǎn)。流動相中加入辛酸，采用人血清白蛋白手性色譜柱可以有效分離benzodiazapine。Warfarin 和oxazepam也用人血清白蛋白手性色譜柱得到了分離，流動相組成為：100mM磷酸緩沖液pH7：乙腈：異丙醇 = 84：10：6。