(一)蛋白質(zhì)的變性作用
1.概念:在某些理化因素作用下,蛋白質(zhì)嚴(yán)密的空間構(gòu)象(次級(jí)鍵特別是氫鍵)破壞,導(dǎo)致若干理化性質(zhì)和生物學(xué)性質(zhì)的改變稱為變性。
2.變性的本質(zhì):破壞非共價(jià)鍵和二硫鍵,不改變蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)。
3.蛋白質(zhì)變性后的表現(xiàn):①生物活性喪失;②理化性質(zhì)改變(溶解度降低、粘度增加、結(jié)晶能力消失、易被蛋白酶水解);
、圩冃缘牡鞍踪|(zhì)易于沉淀,有時(shí)蛋白質(zhì)發(fā)生沉淀,但并不變性。
4.復(fù)性:變性的蛋白質(zhì),只要其一級(jí)結(jié)構(gòu)仍完好,可在一定條件下恢復(fù)其空間結(jié)構(gòu),隨之理化性質(zhì)和生物學(xué)性質(zhì)也重現(xiàn),這稱為復(fù)性。
(二)蛋白質(zhì)的吸收光譜
1.色氨酸、酪氨酸→280nm最大吸收峰。
2.應(yīng)用:可用于蛋白質(zhì)的含量測(cè)定。
(三)蛋白質(zhì)的沉淀
1.蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì):醫(yī)學(xué)教|育網(wǎng)|收集整理蛋白質(zhì)分子顆粒大小在1~100nm膠體范圍之內(nèi)。維持蛋白質(zhì)溶液穩(wěn)定的因素有兩個(gè):
。1)水化膜:蛋白質(zhì)顆粒表面大多為親水基團(tuán),可吸引水分子,使顆粒表面形成一層水化膜,從而阻斷蛋白質(zhì)顆粒的相互聚集,防止溶液中蛋白質(zhì)的沉淀析出。
。2)同種電荷:在pH≠pI的溶液中,蛋白質(zhì)帶有同種電荷。pH>pI,蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷;pH<pI,蛋白質(zhì)帶正電荷。同種電荷相互排斥,阻止蛋白質(zhì)顆粒相互聚集,發(fā)生沉淀。
2.沉淀蛋白質(zhì)的方法:
、冫}析法:在蛋白質(zhì)溶液中加入大量的硫酸銨、硫酸鈉或氯化鈉等中性鹽,破壞蛋白質(zhì)的水化膜和中和電荷,使蛋白質(zhì)顆粒相互聚集,發(fā)生沉淀。
、诒恋矸ǎ菏褂帽恋頃r(shí),必須在0~4℃低溫下進(jìn)行,丙酮用量一般10倍于蛋白質(zhì)溶液體積,蛋白質(zhì)被丙酮沉淀時(shí),應(yīng)立即分離,否則蛋白質(zhì)會(huì)變性,除了丙酮以外,也可用乙醇沉淀。
(四)蛋白質(zhì)的兩性解離及等電點(diǎn)
1.蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì),其解離程度取決于所處溶液的酸堿度。
2.等電點(diǎn)(pI)
在某一pH的溶液中,蛋白質(zhì)解離成陽離子和陰離子的趨勢(shì)及程度相等,成為兼性離子,呈電中性。此時(shí)溶液的pH值稱為該蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。
(五)蛋白質(zhì)的呈色反應(yīng)
有茚三酮反應(yīng)、雙縮脲反應(yīng)等。
上一條·蛋白質(zhì)的變性作用
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